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| 紫花苜蓿 DREB 1 基因的原核表达与蛋白纯化 |
| 闫艳 2, 崔文艺 1, 李大红 1 , 刘军和 1* |
1. 黄淮学院生物工程系 , 河南，驻马店 463000
2. 驻马店园林绿化科研所, 河南，驻马店 463000 |
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摘要 构建 MsDREB1 基因的原核表达载体, 对表达产物进行鉴定和纯化, 为研究 DREB1 基因在植株中功能奠定基础。用冷酚法从紫花苜蓿提取 RNA, 并转化成 cDNA, 然后将其克隆至 pET32a 原核表达载体, 构建重组载体 pET32aDREB1 。用重组质粒转化大肠杆菌 BL21, IPTG 诱导表达后进行 SDS-PAGE 分析, 用 Ni-NTA 亲和层析柱对重组蛋白进行纯化。结果表明 , 原核表达载体构建正确 ; SDS-PAGE 分析, 出现了与 DNAMAN 预测的 43.2 kd 大小一致的蛋白条带;经分析重组蛋白纯化率达到 90%以上。
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